PCR diagnostika - analize na okužbo

Verižna reakcija s polimerazo (PCR) - natančnost z molekularno genetske diagnoze, ki omogoča osebi, da prepoznajo različnih infekcijskih in dedne bolezni, akutni in kronični faze in tudi pred bolezen lahko izrazi.

Verižna reakcija s polimerazo (PCR) v 1983 razvil Myullis Cary (ZDA), za katerega je leta 1993 je prejel Nobelovo nagrado za kemijo.

Analiza PCR za večino okužb postala neke vrste "zlati standard". Večina strokovnjakov se soočajo z njim skoraj vsak dan in ne brez dokončne diagnoze. PCR je pogosto edina reakcija za detekcijo faze aktivne bolezni v trenutkih, ko druga sredstva odpovedo bakteriološke, virološke in imunoloških diagnostičnih metod.

Prednosti PCR diagnostike v sodobni medicini:

• Neposredno odkrivanje prisotnosti patogena (t.j., določenega odseka DNA ali RNA patogena) v vzorcu.
• Visoka specifičnost vam omogoča, da določite edinstveno odsek DNA ali RNA značilnosti določenega patogena, ki odpravlja možnost lažnih alarmov.
• Visoka občutljivost metode PCR lahko zazna tudi enojne celice patogenov (virusov, bakterij). Občutljivost PCR je 10-1000 v celici vzorca (npr občutljivost imunoloških testov in mikroskopsko - Samo 103-105 celic).
• Razvoj a tehnik Universal PCR za odkrivanje različnih patogenov. Cilj študija za PCR je genski material (DNK, RNK) iz patogena. Postopek omogoča prepoznali več patogenov iz biološkega vzorca.
• Rezultati proizvajajo dovolj hitro analizo. Celoten preiskava se izvaja za 4-4.5 ur, najmanj - malo dlje.
• Sposobnost za odkrivanje povzročiteljev simptomov bolezni (predklinične diagnostika) in nato prenosljiva bolezen (retrospektiva diagnoza). Primer predkliničnih diagnozo bo preučila v inkubacijsko dobo (v času od okužbe do pojava pritožb bolnika), kot tudi latentne okužbe (če ni simptomov pri vseh, ampak samo laboratorij podatkov - PCR, na primer). Eden od vrhuncev PCR diagnostiko izvaja PCR v arhivskem gradivu ali bioloških ostankov, kar je pomembno za identifikacijo in očetovstva.

Trenutno PCR diagnoza opravi pomemben razvoj. Greš izboljšanje metode, vedno znova pa so nove sorte PCR, medicinski trg prejme nov testni sistem za to reakcijo. Tako so stroški analize je postala bolj dostopna za široko paleto bolnikov vsako leto.

Kaj je osnova za metodo PCR

Osnova za polimerazno verižno reakcijo ponovimo podvoji (pomnoževanje) določenega odseka DNA ali RNA s pomočjo encimov in vitro. Rezultat je količina DNA ali RNA, primerne za vizualno analizo. Študija se kopira samo del, ki ustreza dane pogoje, in le v razmerah njegove prisotnosti v testnem vzorcu.

Na primer, da material za študijo, sumimo, da vsebuje fragmente DNA ali RNA patogena (slina, kri, urin, izcedek iz spolovil) damo v posebnem reaktorju (toplotna ciklerja). Nadalje njo dodamo specifičnih encimov, ki se vežejo na patogena DNA ali RNA in sintezo njene kopije. Na voljo je v več fazah "verižno reakcijo" tip, in na koncu en izvod genskega materiala se lahko oblikujejo in več sto tisoč izvodov. Sledi analiza in primerjava rezultatov z dostopno zbirko podatkov o strukturi različnih patogenov. Skozi PCR je mogoče ne le opredeliti vrsto patogena, ampak tudi, da kvantitativno rezultat analize, ki je, koliko povzročitelji bolezni v človeškem telesu.

PCR je trenutno širi krog možnosti raziskav v uvodu mutacij, spajanje fragmentov DNK, in se pogosto uporablja v medicini, na primer, za določitev očetovstva, nastanek novih genov in tako naprej.

Kaj se okužba lahko odkrijemo s PCR diagnostiko

1) okužbe s HIV (lahko zazna virus človeške imunske pomanjkljivosti HIV-1)
2) Virusni hepatitis A, B, C, G (RNK-HAV, DNA HBV, RNA-HCV, RNA-HGV)
3) infekcijska mononukleoza (Epstein-Barr DNK -VEB)
4) s citomegalovirusom (DNK-CMV)
5) okužba herpes (herpes virusom simpleks DNA HSV tipa 1 in 2)
6) STI (spolno prenosljivih bolezni s) - ureaplasmosis, bakterijska vaginoza, klamidija, mikoplazmoze, Trihomonozo,
7) tuberkulozo (Mycobacterium tuberculosis)
8) onkogeni virusi - okužba z virusom papiloma (humani papiloma virus (vključno z njegovimi onkogenih tipov 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 in 59)
9) boreliozo, klopni meningoencefalitis
10) Listerioza
11) Candida (glive Candida rodu)
12) infekcija s Helicobacter (Helicobacter pylori)
in drugi

Glede na vrsto patogenov, je PCR diagnostika široko uporabljajo v ginekološki, uroloških praksi, praksi, nalezljivih bolezni, pulmonology, TB, gastroenterologije, hematoloških, onkologije in drugi.

Gradivo za študij in pravila njegove ograje

Material za PCR analizo, ki lahko prepoznajo tuje DNA bakterije ali DNA ali RNA virusa lahko služi različnim biološko okolje in človeško tekočin: sluz, urina, krvi, sputuma, strganje epitelnih celic, tkiv, posteljice, kri, prostate sok, plodovnico, plevralne tekočine.

Ko presejalne teste za spolno prenosljivih okužbah (SPO) med moškimi in ženskami so vzete iz spolnih organov, razmaz ali strganje iz bris ali strganje iz sečnice (sečnice), urina.

Ko presejanje za okužbe (okužbe s herpesom, okužba s CMV, mononukleoze toksoplazmoze, hepatitis B in C, HIV) PCR odvzame kri.

Za diagnozo infekcijske mononukleoze, okužbe citomegalovirus, je treba herpes okužbo žrela bris za presejanje za CMV - urinu. Pogosto je za raziskavo o živčnega škodo sistema v številnih študijah sprejetih cerebrospinalno tekočino.

V pulmonology materiala je sputum, plevralni tekočine.

Ko presejanje za fetalnih okužbe - amnijske tekočine, posteljice tkiva.

Priprava za dovajanje snovi, ki izvajajo PCR diagnostika

Skoraj vsi bolniki, ki so v postopku PCR diagnostiko, lahko računajo na zanesljivih, točnih in hitrih rezultatov, kar je odvisno v veliki meri od možnosti laboratorija, strokovnih laboratorijskih zdravnikov. Ob istem času, mnogi ne zavedajo, da je najbolj zanesljiv v veliki meri odvisna od nas samih, in sicer na podlagi priporočil lečečega zdravnika, življenjskega sloga in pravilnosti ograje materiala. Ko ograja materialne zahtevane pogoje brez kontaminacije (onesnaženja) materiala, zato dvom v objektivnost analize.

Pravilna priprava za dostavo materiala ne predstavlja nobenih težav. Priporočila naslednjih zdravnikov za bolnike:

1) ni, da imajo spolne odnose na dan pred datumom materiala-
2) v krvi za raziskave obravnavala zjutraj na prazen želodec (ne jesti, ne piti) -
3) V času, ko je prvo jutro urin se bo delež v čisto sterilno posodo.

Datumi pripravljenost PCR

Končni rezultat je pripravljena v 1,5-2 dni po dobavi materiala. V nekaterih primerih, rezultat je pripravljen za prvi dan.

Dešifriranje rezultatov PCR

negativna PCR rezultat kaže, da je preskusna snov v času dostave ni našla nobenih sledi o okužb. Večina primerov kaže na pomanjkanje okužbe, ki se poskuša najti v testnem vzorcu.

pozitiven PCR rezultat kaže odkrivanje sledov okužbe v biološkem vzorcu preskusu. Z veliko natančnostjo pozitiven rezultat kaže na prisotnost okužbe v določenem času.

Obstajajo primeri, ko je PCR pozitiven, vendar aktivne okužbe ni mogoče govoriti - tako imenovani "zdravo prevoznik" brez kliničnih znakov bolezni, ki ne zahteva zdravljenja, temveč je potrebno dinamično spremljanje z zdravnikom. To se pogosteje pojavlja pri številnih virusnih okužb (HPV, CMV, okužba EBV, okužba herpes, in drugi) v materialih, kot so slina, strganje na maternični vrat, sečnica, da je iz lokalne pozornost. Vendar pa ne smemo pozabiti, da je prenos okužbe od prevoznikov do zdravih ljudeh lahko, kot prehod v kronično obliko bolezni s postopkom aktiviranja. Če je PCR pozitiven v krvi, potem ni nosilec in zahteva posebno zdravljenje.

Kvantitativni PCR je ocenil zdravnik individualno za določeno okužbo ločeno in nima skupne prehode. Na podlagi rezultatov kvantitativnega PCR zdravnik lahko določi raven aktivnosti okužbe in izpostavi fazi bolezni, ki je nedvomno vplivala na potek in droge predpisan odmerek.

Ena od zadnjih vprašanj, ki zadevajo: kako natančno PCR diagnoze?

3 je definicija za analizo PCR:

1. Natančnost (z veliko verjetnostjo lahko prepoznajo ali odsotnost okužbe).
2. specifičnost (točnost detekcije posameznega okužbe).
3. Občutljivost (tudi pri nizkih nivojih patogenov genetskega materiala v vzorcu zazna okužbe).

Verižna reakcija s polimerazo se skoraj ne daje napačen (tj, ni pozitivni vzorci, kjer infekcija odsoten). Lažno negativnih rezultatov, so redki (najpogosteje je to posledica pomanjkanja aktivne okužbe pri ljudeh v tem trenutku). Na primer, latentne infekcije, kronične okužbe aktivna.