Povezane imunski test (ELISA)

Povezane imunski test (ELISA) - moderne laboratorijski testi, med katerim se preiskava opravi specifičnih protiteles v krvi ali antigenov na posamezne bolezni, z namenom ugotovitve ne le vzrok, temveč fazo bolezni. Rezultati ELISA se lahko izda tako kvalitativno in kvantitativno.

Trenutno se ELISA uporabljajo v naslednjih primerih:

1) iskanje specifičnih protiteles kateremkoli okužbo zabolevaniyu-
2) iskanje antigenov morebitnih bolezni (nalezljive bolezni, spolne) -
3) študija hormonskega stanja patsienta-
4) presejanje za onkomarkery-
5) testiranje na prisotnost avtoimunskih bolezni.

Prednosti ELISA:

1) Visoka specifičnost in občutljivost ELISA (nad 90%).
2) Sposobnost za določanje in spremljanje procesa dinamiko bolezni, t.j. primerjanje količine protiteles v različnih časovnih intervalih.
3) diagnostični razpoložljivost ELISA na katerikoli zdravstveni ustanovi.

Relativno pomanjkanje:

1) Dokaz imunskega odziva (protitelesa), ne pa patogena.

osnovni pojmi

Pred pojasniti bistvo metode ELISA, na kratko je razumeti nekatere pojme.
Protitelesa (ali imunoglobuline - Ig) - specifični proteini, proizvedeni z B -
limfociti (imunske celice) kot odziv na začetku telesa infekcioznega povzročitelja (virus, bakterije, glive, itd). Izločajo imunoglobulin (IgA), imunoglobulin E (IgE), imunoglobulin M (IgM), imunoglobulina G (IgG), imunoglobulin D (IgD). Te se med seboj razlikujejo in so molekulsko maso razpolovni čas udeležbe / nonparticipation v nalezljivih procesov, odkrivanje čas od trenutka okužbe. Če menimo, da je molekulsko maso, največ ga je IgM - je v pentamer (950.000 Da), v nasprotju s preostalim Iga (od 150 na 200 000 Da), tako da IgM preprosto ne more skozi placento. Zato je odkrivanje IgM v otroški 1 letu življenja je vedno znak okužbe pri plodu. Glavnina serumskih imunoglobulinov predstavlja IgG (75-85%) in najnižja - IgE (0.003%). Infekciozni Postopek neposredno vključeni pokazal samo IgA, M, G. IgE so znak alergijskih reakcij in pogojev, in IgD - mogoče odkriti le v bezgavkah in tonzil tkiva, igra pomembno vlogo pri nastanku lokalne imunosti.

razredi imunoglobulinov

antigeni - visoko molekulsko maso organskih snovi, zlasti nalezljivih povzročiteljev bolezni in drugih bolezni, kot tudi različne snovi spremenjene celice, proizvedene v danem bolezni (avtoimunske bolezni, raka).

imunski kompleks - antigen-protitelo sodeluje v imunskem procesu.

O tem, kaj je metoda ELISA.

Obstaja več vrst ELISA (neposredne, blokiranje metoda prijavljenih), vendar v praksi najpogosteje uporablja heterogeno encimskim imunotestom ali ELISA (encimsko imunskim testom)

Osnova za imunotestom imunskega odziva antigena in protitelesa, da se tvori imunski kompleks: antigen-protitelo, ki ima za posledico spremembo encimsko aktivnostjo specifične poškodbe na površini protiteles.

Bistvo metode ELISA

Preprosto povedano, ta proces lahko razdelimo na več faz:

1) Na površini zdravnik luknjami plošče Preizkuševalec je očiščeni antigen specifičnih patogenov. Pri dodajanju biološkega materiala (krvnega seruma) pacienta posebnega reakcija pojavi med antigenom in želenega protitelesa (imunoglobulinov). Ta povezava bo delovala kot "posebni antigen" v naslednjo stopnjo.

2) V tej fazi je IR tvorba (imunskih kompleksov) - reakcijo med "specifični antigen" in konjugata (to imunoglobulina označeni s encima peroksidaze). Dodano posebno kromogen. Rezultat tega encimske reakcije je tvorba obarvane snovi v vdolbinico ploščice, katerega barva intenziteta odvisna od števila imunoglobulinov bolnikov (protitelesa), vsebovanih v materialu.

3) dalje tam pojasnilo: fotometrija z večkanalno spektrofotometra primerjanjem optične gostote testnega materiala z optično gostoto kontrolnih vzorcev, matematičnih rezultatov obdelave. Količina protiteles pri pacientu odvisen od višine optično gostoto vrtin.

Običajno v praksi, uporaba 96 vdolbinami.

Ko meritev optične gostote (OD), izračunan vzorec volumen tekočine (ali koncentracija) specifična protitelesa obsega enote. Rezultat se nato primerja s kontrolnim vzorcem.

Treba je spomniti, da:Za vsak testni sistem razvit, da se upoštevajo rezultati individualni uspešnosti, standardi uspešnosti in patologije (tj "referenčna vrednost"). To je treba upoštevati pri vrednotenju rezultatov vsako študijo primera. Pravilno interpretirati rezultate laboratorijskih "referenčne vrednosti" drugem laboratoriju. Prav tako je napačno primerjavo rezultatov iz različnih laboratorijev skupaj.

Pri določanju ELISA reakcije in ima vrednost tako koncept kot avidnostjo protiteles.
avidnosti protiteles - jakostjo vez protitelesa na antigen, in količina antigena, ki se nahajajo v medsebojni odnos z immnoglobulinami (protiteles). Lakomost je velikega pomena pri ocenjevanju domnevno okužbo izraza, kar je izjemno pomembno pri diagnozi primarne okužbe pri nosečnicah.

Podlaga avidnosti preskus protitelo obsega obdelavo imunski kompleks (antigen-protitelo) raztopino sečnine, da se uniči protein. Vysokoavidnye povezave ostati nedotaknjeno, in nizke avidnosti uničena. Rezultat je podan kot indeks avidnosti, izražen kot odstotek (%).

Katere bolezni se odkrijejo z ELISA diagnostiko?

1. infekcijske bolezni
1,1 Virusni hepatitis A (IgM, G), B antigenov -HBsAg, HBeAg, protitelesa - IgM HBcorAg, Ig skupno HBcorAg, IgG HBeAg), C (protitelo Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) in drugi.
1.2 okužbe s HIV (IgG)
1.3 citomegalovirus okužbo (protitelesa IgM, G)
1.4 Epstein-Barr, okužba ali mononkleoz (IgM, G EA, VCA, NA virusni proteini)
1.5 postherpetična okužba (IgM, G)
1.6 Toksoplazmoza (IgM, G)
1.7 rdečk (IgM, G)
1.8 ošpic (IgM, G), bruceloza (IgM, G), pseudotuberculosis (IgM, G), salmoneloza (IgM, G), šigelozo ali grižo (IgM, G), aspergiloza (IgM, G), klopni encefalitis, borelioza in mnogi drugi.
1.9 parasitosis (LAMBLIOZA, toksokariaza, trihineloza, opistorhoz, ehinokokoza, alveococcosis in drugi), v katerem je odkrita IgG
1.10 STD (spolno prenosljivih bolezni skozi) - mikoplazmozo (IgM, G), Ureaplasmosis (IgM, G), Chlamydia (IgA, M, G), sifilis (IgG)
1,11 infekcija s Helicobacter (IgG)

2. Markerji avtoimunskih bolezni in kazalnike humanega imunskega sistema (Celotni IgE, skupaj IgG, skupaj IgA, skupaj IgM, skupaj IgD, sekretorni IgA, IgG 2, IgG4, CRC kroženje imunskih kompleksov, IgA in IgG protitelesa na gliadin in drugi)

3. Onkologichsekie označevalci (TNF - dejavnik tumorske nekroze, CEA - karcinoembrionski antigen, PSA - prostato specifičnega antigena, hCG - humani horionski gonadotropin, CA 125, alveomutsin in mnogi drugi)

4. reproduktivne motnjeI (estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP- FSH - folikle stimulirajoči hormon in drugi)

5. ščitnice bolezen (Prost in vezan T3, T4, tiroglobulin, ščitnice peroksidaza - TPO, ščitnico stimulirajočega hormona - TTG).

Ta seznam še zdaleč ni vse bolezni so bile ugotovljene z ELISA.

Material za analizo ELISA in pravila ograjo njenih

Najpogostejši material za reakcijo IFA - pacientovega seruma jemlje na prazen želodec. Material lahko služi tudi kot cerebrospinalni tekočini, amnijske tekočine, steklenih vsebine, sluzi za kanal materničnega vratu in uretre tamponov.

Priprava bolnikov za dobavo materiala za IFA

Kri se jemlje na prazen želodec. Pred dobavo krvi ne potrebujejo, da sprejmejo vse droge. Posebno zdravljenje (protibakterijsko, protivirusno, antiparazitik, itd) je treba nemudoma prekiniti vsaj 2 tedna pred študijo.

IFA pogoji proizvodnje

Imunski preizkus materiala je potekala hitro, čez dan. Zamude so lahko v različnih laboratorijih zaradi kopičenja določenega zneska serumov.

Možni rezultati ELISA diagnostiko

Pri ocenjevanju rezultatov posameznih okužb je pomembno razred protiteles opredeljene in njihovo število. To ne vpliva le na vprašanje o etiologiji okužbe (to pomeni, da ali ne), ampak je ocenjena stopnja bolezni (akutne in kronične), kakor tudi prisotnost aktivne okužbe (akutna ali poslabšanje kroničnega) v času raziskave.

Katere so približni čas protiteles (imunoglobulinov - Ig)?

Najstarejši IgM protitelesa. Ti lahko opredelijo s 1-3 tednov po morebitnih okužb, ki so značilni za akutno fazo okužbe. Drugi primer je nastanek protiteles IgM - aktiviranje (ali poslabšanje) kronični proces. IgM kroži v povprečju približno 3 mesece, nato pa je njihovo število postopoma izginja. Vendar pa je pri nekaterih bolnikih, sledeh IgM mogoče zaznati v 1-2 letih po okužbi.

Sodobni sistemi za testiranje so zelo občutljivi, tako da so nespecifični lažne pozitivne rezultate (pogosto pri nosečnicah). Zato mora biti pozitivna IgM v tej skupini bolnikov, ki so se ponovno preveri!

protitelesa IgA pojavijo 2-4 tedne po okužbi, ampak v zadostni količini za odkrivanje - mesec. Serum IgA sintetiziramo plazemskih celic vranice, bezgavk in sluznice sekretorni IgA koncentriramo na sluznico opravlja svojo zaščitno funkcijo - pri lokalni imunosti.

Na 4. teden po okužbi se pojavijo protitelesa IgG. V večini okužb titer postopoma narašča, največ v različnih obdobjih (v povprečju 1,5-2 meseca), potem je titer ostala na nizki ravni in kaže na imuniteto. V nekaterih bolezni (mikoplazmoze, klamidija, Trihomonozo) IgG ni visoka, je znatno zmanjšala zaradi pomanjkanja imunitete v teh okužb.

Zaznavanje izvedbe protiteles različnih razredov:

- Izolirano IgM protiteles pomeni obstoj primarna
okužba.
- Hkratno odkrivanje krvi IgM in IgG značilno za primarno okužbo
V zadnjih 2-3 mesecih, kot tudi poslabšanje kroničnih bolezni. Zato prisotnost IgM v nosečnosti ni vedno znak začetne okužbe.
- Odkrivanje IgG izoliramo in lahko kažejo na odpornost na bolezni,
in kronične okužbe. V drugem primeru je nastavljena in količine protiteles (titer) in spremembe dinamike titer. Značilno je, da so bile opravljene študije v razmiku 2-4-6 tednov.
- Odkrivanje IgA in IgM izolirali kažejo primarno okužbo. ob
skupaj s pojavom IgA IgG domneva aktivacijo kronično okužbo (povprečne 2 tednih po času poslabšanja).

opredelitev IgG avidnosti protitelo je odlično dopolnilo za diagnozo fazi primarne okužbe okužbe z dolgoletno ki ima svoj klinični pomen, še posebej pri ocenjevanju tveganja v maternici okužbe ploda. Odkrivanje nizke avidnosti IgG kaže primarno okužbo in opredeljuje povprečno po 4-6 mesecih po okužbi, redko več. Nizka avidnosti IgG zahtevajo druge laboratorijski dokaz primarne okužbe (IgM). Visoke protitelesa avidnosti so bodisi znak kroničnih bolezni in akutne ali tvorjen imunitete.

Še posebej pri dojenčkih:pri otrocih, mlajših eno leto, in včasih celo 1,5 let v krvi krožečega materin IgG protitelesa proti različnim okužbam (tj, da je bil njihov penetracijo skozi posteljico iz matere v zarodek v maternici). To samo po sebi ni znak prisotnosti okužbe v sedanjosti. Če pri starosti takjm odkrita IgM (spomnimo, da materina IgM prehaja skozi placento ne more), je to znak okužbe ali intrauterini okužbe, pridobljene po rojstvu.

Kvantitativna metoda ELISA

Rezultati ELISA diagnostika (z uporabo encima imunsko analizator), ki je izdana v posebnih enotah:
- Optično gostoto (OG) vzorca - koncentracija specifično protitelo na enoto volumna. Čim višja je absorbanca vzorca, večja je koncentracija protiteles. Nekateri rezultati kažejo dejavnik pozitivnost (CP) - je tudi optična gostota vzorca.
- Enote koncentracijo protiteles (ng / ml ali ng / ml).
- V serumu titer: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 in tako naprej. Diagnostični titri (na kateri je diagnozo bolezni, ne pa dejstvo okužbe) za več različnih bolezni.
- V obliki simbolov - "+", "-" (+ ++ +++ ++++) «?«.
- V kvalitativnem ocenjevanju merilo vrednosti (pozitivne ali negativne).

Pravilno oceniti količino protiteles variantnih imunoglobulinov identifikacije razreda, in, posledično, izpostavljajo fazo bolezni in potrebo po le zdravnik lahko zdravljenje.

Ne smemo pozabiti, da je njihova "referenčna vrednost" (izvedbe norma), in nad katerim posebno diagnosticirali bolezen (variante patologijo) razvit za vsak testni sistem. "Referenčne vrednosti" za različne preskusne sisteme različnih.

Pravilni primerjavo rezultatov ELISA, delo v daljšem časovnem obdobju, je možno le v primeru njihove proizvodnje v istem laboratoriju.