Analiza cerebrospinalni tekočini (CSF)

CSF (cerebrospinalni ali cerebrospinalne CSF tekočine) - biološka tekočina, ki je potrebna za delovanje centralnega živčnega sistema. Njegova raziskava je ena izmed najpomembnejših vrst laboratorijskih testov. Sestavljen je iz pre-analitični fazi (priprava predmeta, zbiranje gradiva in njegovo dostavo v laboratorij), analitično (pravzaprav počne raziskave) in postanalytical (prepis rezultata). Le pravilna izvedba vseh manipulacij na vsakega od teh korakov določa kakovost analize.

Cerebrospinalne tekočine (CSF), tvorjen v horoidnem pletežu možganov prekatov. Pri odraslem subarhnoidalnyh prostorov človeških hkrati in kroži v prekatov v možganih 110-160 ml CSF, v spinalni kanal - 50-70 ml. Tekočina tvorjen neprekinjeno pri hitrosti 0,2-0,8 ml / min, odvisno od intrakranialnega tlaka. Pri zdravem človeku dan oblikovali 350-1150 ml CSF.

Tekočina pridobljen s punkcijo hrbtnega kanala, bolj pogosto - ledvenega - po metodah znanih nevrologi in nevrokirurgi. Njegove prve kaplje so odstranjeni ( "cestni" kri). Nato tekočina zbrani vsaj dve cevi: cev v konvencionalnem (kemično centrifugirajo) za splošno klinično in kemično analizo, sterilno - bakterioloških preiskav. Na obrazcu za napotitev na zdravnika pregledu SSO je treba določiti, ne samo ime bolnika, ampak tudi klinične diagnoze in namen študije.

Ne smemo pozabiti, da dostavijo tekočina vzorcev lab treba zaščititi pred pergrevaniya ali ohladili in vzorcev za odkrivanje bakterijskih polisaharidov serogicheskih testi morajo biti segrejemo v vodni kopeli 3 minute.

Dejanska laboratorijsko testiranje cerebrospinalni tekočini (analitična faza) se izvede v skladu s pravili, sprejetimi v kliničnem laboratoriju v analizo vseh bioloških tekočin, in vključuje naslednje korake:

- makroskopska analiza - fizikalno-kemijskih lastnosti (velikost, barva, znak)
- štetje števila celic,
- Mikroskopija nativne priprava in citologija obarvana preparata-
- biokemijske raziskave,
- Mikrobiološke analize (če je navedena).

Smo ugotovili, da bi bilo primerno in informativno v nekaterih primerih dopolni študijo imunološke SSO in morda - drugih testih, katerih pomen se razpravlja v literaturi.

Dekodiranje izvedba CSF

Normalna brezbarvno CSF ​​in porozrachna (kot destilirano vodo, v primerjavi s katerimi fizikalne lastnosti splošno opisujejo CSF).

Sivo ali sivo-zelena lužnico s primesjo bakterij in levkocitov ponavadi posledica. Red CSF različno jakost (eritrohromiya) s primesjo eritrocitov, ki se pojavljajo, kadar sveže krvavitve ali poškodbe možganov pogon. zazna vizualno pristutstvuyut eritrocitov, ko je vsebnost več kot 500-600 ul.

V patoloških procesov lahko tekočina ksantohromnoy - obarvan v rumeno ali rumeno-rjave izdelkov okvare hemoglobina. Prav tako menijo, xanthosis lažen - barvni tekočine droge povzročajo. Manj pogosto srečamo zelenkasto CSF ​​(izloča gnojen izcedek meningitis, možgani abscesa). Literatura opisuje barvo in korchnevy pijačo - tudi zlom craniopharyngioma ciste v cerebrospinalni poti tekočine.

Motnosti lužnice lahko posledica krvnih celic nečistot ali mikroorganizmov. V slednjem primeru lahko meglice odstrani s centrifugiranjem. Če vsebnost CSF poveča količino grobih proteinov postane motna.

Relativna gostota cerebrospinalni tekočini pridobljen z lumbalno punkcijo, 1,006-1,007. Ko vnetje mening, možganske travme relativno gostoto cerebrospinalni tekočini poveča do 1.015. To zmanjšuje s prekomernim likvorja (hidrocefalusa).

Pri povišanih nivojev fibrinogena v cerebrospinalni tekočini tvorjen fibrinous film ali strdek, ki se pojavi pogosteje tuberkulozo meningitisa. Včasih se je cev s tekočino pustimo pri sobni temperaturi za en dan (če je potrebno natančno določiti -? Ali filma oblikovana). V navzočnosti fibrinous svojemu filmske seciranje iglo prenese na steklu in obarvamo z Ziehl-Neelsen ali kak drug način identifikacije mikobakterije. Običajno CSF ​​98-99% vode.

Kljub temu je študija njegove kemične sestave je pomembna naloga. To vključuje določitev nivoja proteina, glukozo in klorid, in dopolniti z drugimi kazalniki v številnih primerih.

Protein v cerebrospinalni tekočini

Več kot 80% beljakovin CSF iz plazme tokov z ultrafiltracijo. Vsebnost proteinov norme v različnih deležih: ventrikularna - 0,05-0,15 g / l, cisternal 0,15-0,25 g / l, ledveno 0,15-0,35 g / l. Za določitev koncentracije proteina v cerebrospinalni tekočini lahko uporabimo katerokoli od standardiziranih metod (s sulfosalicilno kisline in amonijevega sulfata, in drugo). Povečana vsebnost beljakovin v cerebrospinalni tekočini (giperproteinarhiya) je lahko posledica različnih dejavnikov patogenetske (tabela 1).

Študija beljakovin CSF ne omogoča le, da se pojasni naravo patološkega procesa, temveč tudi za oceno stanja krvno-možgansko pregrado. Kazalnik za te namene lahko albumin, pod pogojem, da je raven v CSF določi imunoloških metod. Določitev albumina izvedemo v zvezi z dejstvom, da je, kot je krvni protein ne sintetizira lokalno in zato lahko "marker" imunoglobulini nadaljnje vnašanje od pretoka krvi zaradi okvarjenim permeabilnosti pregrado. Istočasna določitev albumina v serumu (plazma) krvi in ​​cerebrospinalne tekočine albumina nam omogoča, da izračun indeksa:

Ko se je ta indeks je nepoškodovano krvno-možgansko pregrado manj kot 9, z zmerno škodo - 9-14, z opazno - 14-30, s hudimi poškodbami - 30-100, in povečanje več kot 100 kaže na popoln neuspeh pregrade.

V zadnjih letih povečala zanimanje specifični za CNS proteinov lužnice - nevrona enolazo, S-100 protein, mielinskega bazičnega proteina (MBP), in drugi. Eden od najbolj obetavnih med njimi za klinične namene, se zdi, da MBP. V normalnem CSF je praktično odsotna (njena koncentracija ne presega 4 mg / l) in se pojavi le v patoloških pogojih. Ta laboratorij funkcija ni specifična za določeno kliničnih subjekte, ampak odraža velikost lezij (večinoma povezano z uničenjem bele trdne snovi). Nekateri avtorji to obetaven opredelitev MBP v CSF za spremljanje neuroAIDS razmisliti. Na žalost danes še vedno obstajajo težave, povezane z neposrednim določanje koncentracije proteina.

Glukoza v cerebrospinalni tekočini

Glukoza najdemo v normalnem cerebrospinalni tekočini pri koncentraciji 2.00-4.18 mmol / l. Ta vrednost je predmet večjih nihanj tudi pri zdravih ljudeh, odvisno od režima hrane, telesne dejavnosti in drugih dejavnikov. Natančno oceno ravni glukoze v likvorju hkrati določi svojo raven v krvi, kjer se običajno je to 2-krat višje. Povečane ravni glukoze v krvi (giperglikoarhiya) pojavi pri sladkorni bolezni, akutnega encefalitis, ishemičnih motenj obtočil in drugih bolezni. Gipoglikoarhiya opazili pri meningitisu različnih etiologij, ali aseptično vnetje, neoplastične lezije v možganih in membrane, vsaj - z okužbo herpes, subarahnoidna krvavitev.

Vsaka prednost pred glukozo kot diagnostičnega pokazatelja je laktata (mlečna kislina), kot je njegova koncentracija v cerebrospinalni tekočini (1,2-2,1 mmol / l), ki je neodvisen od tistega v krvi. Njegova raven se v različnih pogojih, povezanih z motnjami v presnovi energije bistveno povečala - meningitis, še posebej - po Gram-pozitivnih flore možganov hipoksije in nekaterih drugih povzročil.

Kloridi v likvorju

Kloridi - vsebnost normalnem cerebrospinalni tekočini - 118-132 mmol / l. Povečana koncentracija v cerebrospinalni tekočini opazimo v nasprotju njihovega odstranjevanja iz telesa (ledvic, srca), pri degenerativnih bolezni in tumorji centralnega živčnega sistema. Zmanjšanje vsebnosti klorida je označena z encefalitis in meningitis.

Encimi v cerebrospinalni tekočini

Tekočina je označen z nizko aktivnost encimov, ki jih vsebuje. Spreminjanje encimske aktivnosti v CSF pri različnih boleznih so splošno nespecifična in vzporedno opisane premike v krvi v teh bolezni (Tabela 2). Drugačen pristop zasluži razlago sprememb dejavnosti kreatin fosfokinaze (CPK). Ta encim v tkivih treh frakcij, ki so značilni ne le z molekularnimi razlik, ampak tudi narava porazdelitve v tkivih: CK-MB (miokard), CK-MM (mišični), CK-BB (možganov). Če ima skupna aktivnost CK v cerebrospinalni tekočini ne osnovno diagnostično vrednost (se lahko poveča, če tumor, možganski infarkt, epilepsije in drugih bolezni) je frakcija CK-BB relativno specifična označevalec poškodovanega možganskega tkiva in njeno aktivnost v cerebrospinalni tekočini korelira z Glasgow lestvici.

Število celic in cerebrospinalni cytogram tekočine

V študiji bioloških tekočin in CSF vključno običajno štetje števila celic v cytogram in madeži obarvano azureozinom (Romanowsky-Giemsa Nocht, Pappenheim). Štetje celičnih elementov v cerebrospinalni tekočini (določitev cytosis), izdelane z Fuchs-Rosenthal komoro, pred vzrejo to Samson reagent 10-krat. Uporaba samo zaradi barve, ne pa katera koli druga. Omogoča celice obarvamo 15 min in celice ohranijo nespremenjen do 2 uri.

Število celic vsej celici, deljeno s 3 do dobljenega cytosis v 1 ul. Za večjo natančnost, upoštevati število celic v treh zborov. Kdaj lahko Fuchs-Rosenthal komora odsotnost Goryaeva uporabljate kamero, s štetjem celic v celotni mreži kot v treh zborov, ki je rezultat pomnoži s 0,4. Do sedaj, obstajajo razlike v enotah števila celic - število celic v komori, v 1 mm ali 1 liter. Verjetno, da je primerno, kljub temu, da izrazijo število celic v cytosis ul. Za izračun števila belih krvnih celic in rdečih krvničk v cerebrospinalni tekočini lahko uporabimo in avtomatiziran sistem.

Povečana vsebnost celic v CSF (pleocytosis) se pogosto pojavi pri vnetnih boleznih, v manjši meri - z meningealno draženje. Najbolj izrazit pleocytosis videl z bakterijskimi okužbami, glivičnih možganskih poškodbah in tuberkulozne meningitis. V epilepsije, arahnitisa, hidrocefalusa, degenerativnih procesov in nekaterih drugih bolezni centralnega štetja živčnega sistema celic ostane normalna.

Obarvanje celic rodu Priprava reagenta Samson omogoča dovolj zanesljivo diferenciranih celic. Toda natančnejše njihove morfološke značilnosti dosegli po fiksiranje in barvanje citoloških preparatov pripravljenih. Sodobni pristop k pripravi teh proizvodov vključuje uporabo cytospin. Vendar tudi v ZDA imajo le 55% laboratorijev. Zato je v praksi veliko lažji način - odlaganje celic na steklu. Priprave je treba dobro posušiti na zraku, nato pa pobarvane.

Obarvane vzorec so število celic elementi. V glavnem predstavljajo krvnih celic (ponavadi - limfocitov in nevtrofilcev vsaj - monocitov eozinofilcev, bazofilcev) more izpolniti plazmi in mastocite, makrofagi, zrnate kroglice (degenerativne tvorita posebna vrsta makrofaga - lipofagov sposoben maščobna degeneracija), celice arahnoendoteliya, epindimy . Morfologija teh celičnih elementov so na splošno dobro znani zdravniki in laboratorijska diagnostika je podrobno opisano v številnih knjigah. Stopnja in narava cytogram pleocytosis CSF z omogoča opredelitev narave patološkega procesa (tabela 3).

Levkocitoza pogosto spremlja akutno okužbo (lokalno in razpršeno meningitis). CSF eozinofilija redko - če možgani ehinokokoza, eozinofilnega meningitis. CSF eozinofilija ni v korelaciji praviloma s številom eozinofilcev v krvi. Limfocitna pleocytosis CSF pojavi pri virusni meningitis, multiple skleroze, kronične faze tuberkulozne meningitis po operacijah na možganske membrane. V patološke procese CŽS opazili polimorfizem limfocitov, med katerimi se aktivirajo. Zanje je značilno prisotnosti obilno citoplazmo z ločenima palely azurophilic granule, so nekatere celice otshnurovku ali fragmentacija citoplazmi (clasmatosis). Plazmatke vsebovane v cytogram virusnega ali bakterijskega meningitisa, subakutni vnetnih procesov, med predelavo iz nevrosifilisa. Monociti v postopku degeneracijo v cerebrospinalni tekočini hitreje limfocitov opazili pri multipli sklerozi, progresivne panencefalitisa, kronična vnetja tli. Makrofagov - "pomočniki" liker, pojavljajo z krvavitve, okužbe, travmatični in ishemične nekroze.

Včasih CSF odkrije nenormalne celice - elemente, ki zaradi svoje morfološke značilnosti ni mogoče pripisati specifične celične oblike. Atipične celice najdemo pri kroničnih vnetnih procesih (tuberkulozne meningitis, multipla skleroza, itd), in so pogosto tumorske celice. Verjetnost ugotovi rakave celice v cerebrospinalni tekočini v možganskih tumorjev je nizka (manj kot 1,5%). Odkrivanje curka celic v CSF v hematoloških malignih bolezni kaže neuroleukemia.

Analiza sestave lužnice je treba oceniti razmerje beljakovin in celičnih elementov (disociacije). Ko celičnega proteina disociacija opozoriti pleocytosis izrazijo pri normalni ali nekoliko povečani vsebnosti beljakovin. To je značilno za meningitis. Belkovokletochnaya disociacija označen s giperproteinarhiey pri normalnem cytosis. Ta pogoj je značilno za procese stoječih v cerebrospinalni poti tekočine (tumorja, arahnitisa et al.).

Klinični razmere včasih zahtevajo štetje števila eritrocitov v krvavem likvorja (za objektivizacijo obsega krvavitve). Štetje rdečih krvnih celic, kot tudi v krvi. Kot je navedeno zgoraj, se barva lužnico spremembe, če v 1 mm vsebuje več kot 500-600 eritrocitov opazno obarvanje pojavi v prisotnosti približno 2000, ko bodo hemoragično raven eritrocitov od 4000 / L.

Mikrobiološke preiskave likvorja

Ena izmed najbolj pogostih bolezni centralnega živčnega sistema je gnojni meningitis. V takih primerih, posebno nujnosti študija mikorobiologicheskoe. Vključuje okvirni preizkus - bacterioscopy droge in klasičnih tehnik kulture. Bacterioscopy lužnico je omejena diagnostično vrednost, zlasti pri pripravi transparentnega CSF. Bris pripravimo iz blata alkoholnih pijač, pridobljenih s centrifugiranjem okarshivayut metilen modro ali Gram madež, čeprav nekateri avtorji menijo, da je najnovejša različica barve "Delati" celične elemente in ustvarja artefakte. Ko meningitis in abscesov dalo raznovrstni flori, ki ustreza glede na naravo bolezni. Ne glede na rezultate mikroskopijo bakterijskega meningitisa diagnoze je potrebno potrditi s kulturo testom, ki postane odločilni faktor pri diagnosticiranju te skupine bolezni in izbiro ustreznega zdravljenja. To se izvede v skladu z Odredbo № 375 Ministrstva za zdravje Ruske federacije 23.12.98 "o ukrepih za krepitev nadzora in preprečevanja meningokoknih okužb in gnojni bakterijskega meningitisa." Najpogostejši vzrok bakterijskega meningitisa je Gram-negativna diplokok Neisseria meningitidis, ki jih je mogoče zaznati 80% primerov, tudi ko mikroskopijo.

mikroskopija CSF

Običajno v cerebrospinalni tekočini so prisotne samo limfociti in monociti. V različnih bolezni in bolezenskih stanj v CSF lahko pojavijo druge vrste celic.

Limfociti so podobne velikosti na eritrocite. Limfociti imajo veliko jedro in ozek rob citoplazmo nepobarvana. Običajno v cerebrospinalni tekočini vsebuje 8-10 limfocitne celice. Njihovo število je v tumorji centralnega živčnega sistema povečala. Limfociti pojavijo pri kroničnih vnetnih procesov v lupin (tuberkulozne meningitis, tsistitserkoznom arahnitis).

Plazemske celice v cerebrospinalni tekočini. Celice so večje od limfocitov, velika jedra, ki se nahaja izsredno, veliko citoplazme z relativno majhno količino jeder (velikost celic - 6,12 mm). Plazemskih celic v cerebrospinalni tekočini najdemo le v patoloških primerih je trajanje sedanjih vnetnih procesov v možganih in membranah, pri encefalitis, tuberkulozne meningitis, arahnitisa tsistitserkoznom in drugih bolezni pri pooperativnem obdobju, kadar počasno celjenje ran.

Fabric monocite v likvorju. Velikost celic - od 7 do 10 mikronov. V normalnem tekočine lahko včasih pojavijo kot posamezne kopije. Monocite najdemo v cerebrospinalni tekočini po operaciji na centralni živčni sistem, z dolgimi trenutnih vnetnih procesov v lupinah. Prisotnost tkiva monocitov govori o aktivnem reakcijo tkiva in normalno celjenje ran.

Makrofagov v likvorju. Lahko imajo jedra različnih oblik, ponavadi se nahaja na obrobju jedra celic citoplazmi vsebuje votlinic in vključkov. V normalnih makrofagov SSO ne pride. Prisotnost makrofagov v normalnem številom celic CSF opazili po krvavitev ali vnetja. Značilno je, da se pojavljajo v pooperativnem obdobju, ki ima napovedni pomen in govori delovanja očiščenega lužnice.

Zrnate kroglice v cerebrospinalni tekočini. Celice z maščobno infiltracijo - s prisotnostjo makrofagov v citoplazmi maščobnih kapljic. V obarvanih pripravah cerebrospinalne celic tekočin imajo majhno obrobno nahaja jedrom in citoplazmo grobo. Vrednost celice je drugačna in je odvisna od vključenih mast kapljic. najdenih v patološkem tekočine, pridobljene od možganskih cist v možganskem tkivu žarišča propad tumorjev Granularne krogle.

Nevtrofilci v CSF. Kamera je identičen v obliki periferne krvi nevtrofilcev. Prisotnost nevtrofilcev v CSF tudi v minimalnih količinah, ali označujejo prvemu, ali imajo vnetno reakcijo. Prisotnost spremenjenih nevtrofilcev označuje dušenje vnetnega procesa.

Eozinofilci v CSF. Določeno v cerebrospinalni tekočini z enakomerno, sijoča ​​zrn. Eozinofilci pojavljajo v subarahnoidna krvavitev, meningitis, tuberkulozo in syphilitic možganskih tumorjev.

Epitelne celice v cerebrospinalni tekočini. Epitelijskih celic, ki omejujejo subarahnoidne prostor, najdemo v cerebrospinalni tekočini redko. Ta velike okrogle celice z majhno okroglih ali ovalnih jeder. Najdemo v tumorjih, včasih vnetnih procesov.

Tumorske celice in kompleksov v cerebrospinalni tekočini. Najdemo jih v celici in obarvajo pripravo liker. Maligne celice so lahko naslednje vrste tumorjev:

•  meduloblastomih;
•  spongioblastoma;
•  astrocitom;
•  rak.

Kristale v lužnice. Najdeno v cerebrospinalni tekočini redko, če je tumor razpad.

Elementi Echinococcus v likvore- kljuke scolexes, citin lupina delci - v cerebrospinalni tekočini so redke.

PCR diagnostika lužnico

V zadnjih letih so nekateri obljubo v etiološke diagnostičnih neuroinfections povezana z razvojem molekularnih genetskih tehnik za detektiranje nukleinskih kislin infekcij v cerebrospinalni tekočini (PCR diagnostika).

Tako tekočina je medij jasno odziven na patoloških procesov v centralnem živčnem sistemu. Globina in značaj njenih sprememb je zaradi globine patofizioloških motenj. Pravilna ocena laboratorij liquorologic simptomov pomaga pojasniti diagnozo in oceniti učinkovitost zdravljenja.